Diabetologia：转录但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次成现肝细胞自身免疫球受体到成现1M-心血管疾病流行病学腹泻的困难重重率在成人时期就有不错的描绘，多个肝细胞自身免疫球受体阴性的成人中都有70%在小鼠转换后10天内患心血管疾病，而随访15年的成人这一比率上升到84%。相比之下之下，分之一流行病学1M-心血管疾病一半以上的M-1M-心血管疾病的中风前提还从未得到充分的量化。

越来越多的人开始用作应当于系统来定义1M-心血管疾病的困难重重：个本体在成现多种肝细胞自身免疫球受体时转至第1以后，成现高血压异常时转至第2以后，成现腹泻时转至第3以后。一些多发肝细胞自身免疫球受体阴性的个本体，在1期和2期，困难重重较比起慢，并的发展为中风的1M-心血管疾病。我们以后描绘了一两组在首次测定到多种肝细胞自身免疫球受体检验后至寡10年无心血管疾病的极比起慢困难重重者，这两组高血压人数寡，但构造非常明确。随后，我们发现肝细胞自身上皮细胞依赖性CD8+T细胞内催化当在困难重重加速的高血压中都基本不存在，但在全面性中风和长期存在的心血管疾病高血压中都很更易测定到。这意味著声称，与困难重重高血压相比之下，这些高血压自身免疫催化当的缓冲增强。

早期量化声称，尽管缓冲性T细胞内(Treg)数量正常，但心血管疾病高血压存在一些新功能有缺陷，其中都包括对IL-2的催化当技能降低。此外，心血管疾病高血压中都的振荡当CD4+T细胞内意味著对缓冲更是具抵抗性，平庸为振荡当T细胞内的依赖性减弱，自然消除的Treg和本体外消除的可借Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞内中都IL-2催化当减弱。本量化的借以是描绘了CD4+缓冲性T细胞内(Treg)在大群极加速困难重重者中都的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX量化是一项以人群为基础的纵向量化，在21岁表列出确诊的高血压亲友中都检查1M-心血管疾病的危险考量。我们以后描绘了长期加速困难重重者的构造，他们维持多重肝细胞自身免疫球受体阴性大约10年，但从未成现心血管疾病的流行病学腹泻，比起慢性或非顺利性功能自身免疫。随后，10名继续维持无心血管疾病并愿意共享大量血液循环检验的加速困难重重者归属于T和B细胞内新功能量化。在迄今为止的量化中都，8名比起慢困难重重者(SP两组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肝细胞自身免疫球受体阴性。所有的参与者都保持稳定1M-心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫球受体对某些上皮细胞的阴性催化当，然而，一名高血压已经保持稳定2期至寡6年，但从未成现流行病学腹泻，一名高血压被病患为心血管疾病，该成年人72岁，在采集实验检验时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中都对该NADP顺利进行了实际上评核。裂解外周血单个核能细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内妖术和T细胞内依赖性试验评核NADP中都Treg的高频率、表M-和新功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)顺利进行无监督聚类量化，评核Treg表M-。

结果：与肥胖NADP相比之下，来自比起慢困难重重本体的梦境CD4+T细胞内的监督聚类揭示，可借的梦境CD4+ Treg高频率上升，与抗生素可借的TNFR相关受体(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c急剧下降的高血压与困难重重加速者和也就是说的对照两组相比之下，Treg谱有所不同。新功能量化声称，与肥胖NADP相比之下，来自加速困难重重本体的Treg介导的CD4+振荡当T细胞内依赖性显著损伤。平庸为对振荡当CD4+T细胞内CD25和CD134暗示的依赖性上升。

上图1 深入的表M-量化揭示，CD4+Treg亚M-在比起慢困难重重链表中都上升。由FlowSOM降解的Treg寝室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物暗示检验成10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个不同Treg标示降解的10个元簇的MST。每个路由代表一个集群(100个集群)，更是大的元集群(10个元集群)在路由两组周围上色。每个路由中都的点心上图暗示单个标示的暗示级别。(b)每个元聚类的热上图，以揭示整本体标示暗示。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)降解上图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的大块。(e-l)相比之下轻元素为每个metacluster装中央线上图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。绿色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用作CITRUS的预测模M-证实，Treg高频率的上升是困难重重加速的标志。基准依赖型(a - f)和柑橘量化(g-k)比起SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利进行裂解，建模FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及NADPSP 606(绿色)中都CD25+ cd127的高频率综合上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的装中央线上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示风速着色，记号突成的簇被辨认为SP和HD链表二者之间的不同。(j)装中央线上图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中都，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比之下轻元素(比率)。(k)直方上图揭示每个簇的表M-(紫色)和Treg标示相比之下暗示与背景暗示(紫色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中都标示的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

上图3 与肥胖献血者相比之下，困难重重加速者梦境treg的GITR上升。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个暗示标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热上图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR暗示串联，揭示直方上图(c)和综合上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADP包括，p< 0.05(紫色)NADPSP 606和也就是说的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR暗示，从基准依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)串联，揭示直方上图(e)和综合上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

上图4 来自加速困难重重的CD4+ treg细胞内操纵振荡当CD4+T细胞内的技能降低。SP两组用紫色的中央线和红色暗示，HD两组用银色的中央线和红色暗示，绿色的中央线/红色暗示NADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被标示为CFSE, Treg按通过观察的比率试样。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，养成3几天后顺利进行流式细胞内妖术测定。(a-d)与CD4+应当答者相比之下应当的treg养成(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性一般而言。用作阴性对照(可借的响应当细胞内包含treg)计算依赖性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

上图5 振荡当CD4+T细胞内对加速困难重重的T细胞内再造的依赖性更是尖锐。SP两组用紫色的中央线和红色暗示，HD两组用银色的中央线和红色暗示，绿色的中央线/红色暗示NADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标示，treg按通过观察的比率试样。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，养成3几天后顺利进行流式细胞内妖术(CD25反染)和细胞内因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者协同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

证明了结论：我们得成的证明了结论是，来自加速困难重重子的再造梦境CD4+Treg在GITR暗示中都得到了引入和丰富，合理化了进一步量化Treg在1M-心血管疾病意味著性个本体中都的关联性的重要性。

标题成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28